Wpływ leczenia trombiną preparatów czynnika VIII i małego aktywnego fragmentu związanego z Ca2 +.

Gdy preparaty ludzkiego, psiego lub bydlęcego czynnika VIII poddaje się chromatografii na 4% agarozie przy sile jonowej 0,2, aktywność czynnika VIII wymywa się jako pojedynczy pik w objętości pustej przestrzeni z nieznacznym ogonem. Inkubacja takich preparatów z rozcieńczoną (0,01 U / ml) wysoce oczyszczoną trombiną powoduje pewną aktywację czynnika VIII. Chromatografia takich mieszanin inkubacyjnych, w tych samych warunkach jak poprzednio, powoduje wymywanie dwóch szczytów aktywności czynnika VIII w objętości pustej przestrzeni i jedno znacznie później z wyraźnym ogonem. Szczyt objętości pustki ma większość białka i pewną aktywność czynnika VIII. Te puste objętościowe frakcje zawierają również całą aktywność czynnika von Willebranda preparatów bydlęcych traktowanych trombiną. Continue reading „Wpływ leczenia trombiną preparatów czynnika VIII i małego aktywnego fragmentu związanego z Ca2 +.”

Charakterystyka antygenów z nietypowych Haemophilus influenzae rozpoznawanych przez ludzkie przeciwciała bakteriobójcze. Rola białek błony komórkowej Haemophilus.

Główne antygeny błony zewnętrznej, białka i lipopolisacharydy (LPS), z nietypowych Haemophilus influenzae, scharakteryzowano i zbadano jako cele dla ludzkich przeciwciał bakteriobójczych zależnych od dopełniacza. Zewnętrzne błony z dwóch nietypowych izolatów H. influenzae, które powodowały zapalenie ucha środkowego i zapalenie płuc (ucha środkowego i aspiracje poprzeczne) zostały przygotowane przez strzyżenie drobnoustrojów w EDTA. Membrany te porównano z membranami otrzymanymi niezależnie przez obróbkę sferoplastów i lizozymem całych komórek i stwierdzono, że mają one: podobny układ elektroforezy w żelu z dodecylosiarczanem-poliakryloamidem (SDS-PAGE) białek; identyczne gęstości (rho = 1,22 g / cm3); i minimalna aktywność dehydrogenazy d-laktozy, co wskazuje na czystość z błon cytoplazmatycznych. Błonę zewnętrzną solubilizowano w buforze dezagregacji LPS i białka oddzielono od LPS metodą chromatografii na sita molekularnego. Continue reading „Charakterystyka antygenów z nietypowych Haemophilus influenzae rozpoznawanych przez ludzkie przeciwciała bakteriobójcze. Rola białek błony komórkowej Haemophilus.”

Wzrost limfocytów z receptorami Fc dla IgE u pacjentów z alergicznym zapaleniem błony śluzowej nosa podczas sezonu pylenia traw.

Limfocyty krwi obwodowej od 10 niealergicznych dawców i 7 pacjentów cierpiących na sezonowy alergiczny nieżyt nosa i otrzymujących leczenie odczulające analizowano za pomocą testów rozetowych na receptory Fc dla IgE (Fc epsilon R) i IgG (Fc gamma R) przed, podczas i po sezonie pylenia traw . Sześciu z siedmiu pacjentów miało umiarkowanie podwyższone poziomy IgE (330 +/- 268 IU / ml), wszystkie miały wysokie miana przeciwciał uczulających skórę na pyłki traw i przeciwciała IgE w surowicy mierzone za pomocą radiologicznych testów antybakteryjnych (RAST). Siedmiu niealergicznych dawców miało 2-30 IU / ml IgE i ujemny RAST, podczas gdy trzy miały 91-267 IU / ml IgE, a dwa były dodatnie pod względem RAST w stosunku do pyłków traw. W marcu, gdy pacjenci byli bezobjawowi, średnia +/- SD limfocytów Fc epsilon R + nie różniła się istotnie od niealergicznej grupy kontrolnej: niealergiczny Fc epsilon R + 1,2 +/- 0,9% (29 +/- 20 /, mm3 ), alergiczny Fc epsilon R + 2,0 +/- 3,1% (48 +/- 52 / mm3). Natomiast podczas sezonu pylenia traw w maju i czerwcu, kiedy u pacjentów wystąpiły objawy alergicznego zapalenia błony śluzowej nosa, mieli oni istotnie (P mniej niż 0,01) więcej limfocytów Fc epsilon R + niż kontrolne: niealergiczny Fc epsilon R + 1,7 +/- 1,9% (40 +/- 46 / mm3), alergiczny Fc epsilon R + 4,7 +/- 1,2% (134 +/- 69 / mm3). Continue reading „Wzrost limfocytów z receptorami Fc dla IgE u pacjentów z alergicznym zapaleniem błony śluzowej nosa podczas sezonu pylenia traw.”

Rola objętości w regulacji wydzielania wazopresyny podczas ciąży u szczurów.

Wcześniej obserwowaliśmy, że osmoregulacja i próg osmotyczny dla wydzielania hormonu antydiuretycznego zostały zmienione podczas ciąży u szczurów Sprague-Dawley, a niniejsze badanie oceniało wpływ objętości na uwalnianie wazopresyny argininy (AVP) podczas ciąży u tego gatunku. Podstawowa osmolalność osocza (Posm) i objętość wewnątrznaczyniowa wynosiły 297 +/- 3 mosmol / kg i 16,2 +/- 1,2 ml u dziewiczych zwierząt w porównaniu z 290 +/- 2 mosmol / kg i 20.2 +/- 2.3 ml u 14-c szczury i 287 +/- 3 mosmol / kg i 25,2 +/- 2,3 ml u szczurów w wieku 21 dni (w perspektywie krótkoterminowej) (P mniej niż 0,001, każda grupa ciężarna w porównaniu z dziewicą). Zmniejszenie objętości izosmotycznej wytworzono przez dootrzewnowy glikol polietylenowy. Objętość zmniejszyła się z do 26%, a ciśnienie krwi utrzymywało się na stałym poziomie aż do 16%. Osocze AVP (PAVP) nie wzrosło znacząco ani w grupie zwierząt w ciąży, ani w kontroli z pierwszego tłoczenia, aż do wyczerpania objętości krwi osiągnęło 6-7%, po czym poziomy wzrosły w podobny sposób wykładniczo u dziewiczych, 14-dniowych i 21-cio ciężarnych zwierząt . Continue reading „Rola objętości w regulacji wydzielania wazopresyny podczas ciąży u szczurów.”

Niektóre efekty wapnia na aktywację ludzkiego czynnika VIII / Von Willebrand Factor Protein przez trombinę

Gdy białko czynnik VIII / czynnik von Willebranda (FVIII / vWF) poddaje się ponownemu chromato- grafowaniu na 4% agarozie w 0,25 M CaCl2, aktywność białka i vWF pojawia się w objętości pustej przestrzeni, ale większa część aktywności prokoagulacyjnej FVIII wypada później. Ostatnie dowody sugerują, że opóźniona aktywność prokoagulacyjna czynnika VIII to proteolitycznie zmodyfikowana postać białka FVIII / vWF, która filtruje anomalnie z agarozy w 0,25 M CaCl2. Aby sprawdzić, czy trombina jest zaangażowana w proteazę, zbadano wpływ 0,25 M CaCl2 na FVIII / vWF i jego reakcję z trombiną. Około 30% aktywności prokoagulacyjnej FVIII zostało natychmiast utracone, gdy roztwory białka FVIII / vWF wytworzono w CaCl2 0,25 M. Gdy FVIII w 0,15 M NaCl aktywowano za pomocą 0,04 U trombiny / ml, a następnie uzyskano 0,25 M w CaCl2, aktywność prokoagulacyjna o szerokim zakresie stężenia białka FVIII / vWF pozostawała aktywowana przez co najmniej 6 godzin. Continue reading „Niektóre efekty wapnia na aktywację ludzkiego czynnika VIII / Von Willebrand Factor Protein przez trombinę”

Zwłóknienie płuc wywołane przez bleomycynę u chomików. Pęcherzykowy produkt makrofagowy zwiększa fibroblastyczną prostaglandynę E2 i cykliczny monofosforan adenozyny i hamuje proliferację fibroblastów i produkcję kolagenu.

Zwłóknienie płuc wywołane przez bleomycynę u chomików jest związane z akumulacją kolagenu, która wynika ze zwiększonej szybkości syntezy kolagenu płucnego. Jednakże 1-2 tygodnie po wkropleniu dotchawiczym bleomycyny, tempo syntezy kolagenu w płucach spada w kierunku wartości kontrolnych. Aby ocenić potencjalną rolę makrofagów oskrzelowo-pęcherzykowych w regulowaniu produkcji kolagenu płucnego, badaliśmy wpływ makrofagów z chomików leczonych normalnie i bleomycyną na fibroblasty in vitro. Zaobserwowaliśmy: (a) Pożywka z hodowli makrofagów zmniejszyła inkorporację fibroblastów [3H] tymidyny i nie ulegające degradacji wytwarzanie [3H] hydroksyproliny w sposób zależny od dawki. Liczba komórek fibroblastów była obniżona w eksponowanych hodowlach, a żywotność fibroblastów pozostała niezmieniona. Continue reading „Zwłóknienie płuc wywołane przez bleomycynę u chomików. Pęcherzykowy produkt makrofagowy zwiększa fibroblastyczną prostaglandynę E2 i cykliczny monofosforan adenozyny i hamuje proliferację fibroblastów i produkcję kolagenu.”

Analiza in vivo białka trzustki i biosyntezy insuliny w modelu szczurzym dla cukrzycy insulinoniezależnej.

Celem tych eksperymentów było oszacowanie biosyntezy insuliny in vivo w modelu szczurzym dla cukrzycy insulinoniezależnej. Częstotliwość biosyntezy insuliny określono u zwierząt w wieku 4 tygodni, którym wstrzyknięto 90 mg / kg streptozotocyny 2 dni po porodzie. Zwierzęta kontrolne i z cukrzycą nie różniły się masą ciała ani glikemią na czczo. Poziom glukozy w osoczu był znacząco podwyższony (186 +/- 13 mikrogramów / dl w porównaniu z 139 +/- 7 mg / dl, P mniej niż 0,05), a zawartość insuliny trzustkowej została zmniejszona (41 +/- 2 mikrogramy / g w porównaniu z 63 + / – 8 mikrogramów / g, P mniej niż 0,05) u szczurów z cukrzycą. Biosyntezę insuliny oszacowano in vivo przez pomiar i porównanie włączenia [3H] leucyny do proinsuliny z włączeniem do całkowitego białka trzustki 45 minut po wstrzyknięciu. Continue reading „Analiza in vivo białka trzustki i biosyntezy insuliny w modelu szczurzym dla cukrzycy insulinoniezależnej.”

Indukcja nefropatii błonowej u królików poprzez podawanie egzogennego antygenu kationowego: DEMONSTRACJA ROLI PATOGENICZNEJ NA OPŁATY ELEKTRYCZNE

Badaliśmy rolę antygenowego ładunku elektrycznego jako determinanty lokalizacji kłębuszkowego układu immunologicznego u królika. Zapalenie nerek wywołane przez nudności w surowicy było indukowane w grupach białych królików nowozelandzkich przez codzienne 25-mg dożylne iniekcje bydlęcej albuminy surowicy (BSA) chemicznie zmodyfikowane, aby były kationowe (pI> 9,5) lub bardziej anionowe (pI, 3,5-4,6); dodatkowa grupa otrzymywała niezmodyfikowaną natywną BSA (pI, 4,5-5.1). Analizowano czynniki, o których wiadomo, że wpływają na lokalizację kompleksu immunologicznego, np. Wielkość cząsteczkową podawanego antygenu i wynikające z niego krążące kompleksy immunologiczne, immunogenność i czas zniknięcia z krążenia i stwierdzono, że są one podobne zarówno dla anionowego, jak i kationowego BSA. Modyfikacja ładunku zwiększyła nieimmunologiczny klirens kationowego i anionowego BSA w porównaniu z natywnym BSA. Continue reading „Indukcja nefropatii błonowej u królików poprzez podawanie egzogennego antygenu kationowego: DEMONSTRACJA ROLI PATOGENICZNEJ NA OPŁATY ELEKTRYCZNE”

Ostra przerywana porfiria: charakterystyka nowej mutacji w genie strukturalnym deaminazy porfobilinogenu. Demonstracja niecatalitycznych produktów pośrednich enzymów stabilizowanych przez związany substrat.

Aby zbadać patologię molekularną w ostrej przerywanej porfirii (AIP), określono naturę defektywnej deaminazy porfobilinogenu (PBG) w lizatach erytrocytów od 165 heterogotów AIP z 92 niepowiązanych rodzin reprezentujących 20 różnych grup etnicznych lub demograficznych. Badania immunologiczne i fizykochemiczne ujawniły występowanie czterech klas mutacji dezaminaz PBG. W większości badanych rodzin ilość białka immunoreaktywnego odpowiadała ilości aktywności enzymatycznej, co wskazuje na brak reagującego krzyżowo materiału immunologicznego (CRIM) wytwarzanego przez zmutowany allel. W 78 z tych rodzin ujemnych pod względem CRIM (oznaczonych jako typ 1), dotknięte heterozygoty wykazywały połowę prawidłowej aktywności deaminaz PBG. W trzech rodzinach (oznaczonych jako negatywne 2 typu CRIM) u pacjentów z objawami stwierdzono zwiększone wydalanie z moczem kwasu delta-aminolewulinowego i PBG oraz prawidłowe stężenie erytrocytów w aktywności deaminaz PBG. Continue reading „Ostra przerywana porfiria: charakterystyka nowej mutacji w genie strukturalnym deaminazy porfobilinogenu. Demonstracja niecatalitycznych produktów pośrednich enzymów stabilizowanych przez związany substrat.”

Powinowactwo cystationiny a-Syntaza do 5-fosforanu pirydoksalu w hodowlanych komórkach: MECHANIZM DLA HOMOCYSTYNURY ODPOWIEDNIEJ DO PYRIDOKSYNY

Poprzednie próby korelacji odpowiedzi in vivo na pirydoksynę z testami in vitro aktywności a -syntazy cystationinowej u pacjentów z niedoborem syntazy z udziałem homocystinurii tylko częściowo zakończyły się sukcesem. Wszystkie takie badania przeprowadzono jednak z ekstraktami hodowanych fibroblastów skóry hodowanych w pożywce zawierającej wysokie stężenie (1000 ng / ml) pirydoksalu. Ostatnio wykazano, że takie warunki wzrostu mogą ukrywać ważne aspekty interakcji enzym-koenzym poprzez nasycanie większości cząsteczek syntazy za pomocą ich kofaktora, 5-fosforanu pirydoksalu, ustaliliśmy warunki wzrostu komórek w pożywce wolnej od pirydoksalu. W tych warunkach wewnątrzkomórkowy 5 -fosforan pirydoksalu spadł o> 95%, a nasycenie apsyenzymu .-syntezy cystationiny 5-fosforanem pirydoksalu zmniejszyło się z wartości predefiniowanej o 70% do <10%. Gdy takie zubożone komórki hodowano w pożywkach zawierających stężenia pirydoksalu w zakresie od 0 do 1000 ng / ml, komórkowy fosforan 5-pirydoksalu osiągnął maksymalnie 30 ng / mg białka komórkowego przy średnim stężeniu pirydoksalu wynoszącym 100 ng / ml. Continue reading „Powinowactwo cystationiny a-Syntaza do 5-fosforanu pirydoksalu w hodowlanych komórkach: MECHANIZM DLA HOMOCYSTYNURY ODPOWIEDNIEJ DO PYRIDOKSYNY”