Powinowactwo cystationiny a-Syntaza do 5-fosforanu pirydoksalu w hodowlanych komórkach: MECHANIZM DLA HOMOCYSTYNURY ODPOWIEDNIEJ DO PYRIDOKSYNY

Poprzednie próby korelacji odpowiedzi in vivo na pirydoksynę z testami in vitro aktywności a -syntazy cystationinowej u pacjentów z niedoborem syntazy z udziałem homocystinurii tylko częściowo zakończyły się sukcesem. Wszystkie takie badania przeprowadzono jednak z ekstraktami hodowanych fibroblastów skóry hodowanych w pożywce zawierającej wysokie stężenie (1000 ng / ml) pirydoksalu. Ostatnio wykazano, że takie warunki wzrostu mogą ukrywać ważne aspekty interakcji enzym-koenzym poprzez nasycanie większości cząsteczek syntazy za pomocą ich kofaktora, 5-fosforanu pirydoksalu, ustaliliśmy warunki wzrostu komórek w pożywce wolnej od pirydoksalu. W tych warunkach wewnątrzkomórkowy 5 -fosforan pirydoksalu spadł o> 95%, a nasycenie apsyenzymu .-syntezy cystationiny 5-fosforanem pirydoksalu zmniejszyło się z wartości predefiniowanej o 70% do <10%. Gdy takie zubożone komórki hodowano w pożywkach zawierających stężenia pirydoksalu w zakresie od 0 do 1000 ng / ml, komórkowy fosforan 5-pirydoksalu osiągnął maksymalnie 30 ng / mg białka komórkowego przy średnim stężeniu pirydoksalu wynoszącym 100 ng / ml. Maksymalne nasycenie aposyntazy koenzymem w komórkach kontrolnych osiągnięto przy średnim stężeniu pirydoksalu wynoszącym 10 ng / ml. Przeciwnie, maksymalne nasycenie resztkowej aposyntazy w komórkach od pacjenta reagującego na in vivo uzyskano przy średnim stężeniu pirydoksalu wynoszącym 25-50 ng / ml, podczas gdy z komórek od pacjenta niereagującego in vivo uzyskano przy stężeniu 100 ng / ml. Oszacowanie powinowactwa kontroli i zmutowanej a-syntezy cystationiny do 5 -fosforanu pirydoksalu w ekstraktach komórkowych potwierdziło różnice obserwowane w nienaruszonych komórkach. Pozorny Km cis-joniny cystationiny wobec 5 -fosforanu pirydoksalu w ekstraktach zubożonych komórek od czterech pacjentów reagujących na in vivo był dwa do czterech razy większy niż w przypadku kontroli. Przeciwnie, Km dla 5 -fosforanu pirydoksalu w dwóch liniach od pacjentów niereagujących in vivo było 16- i 63-krotnie normalne. Te wyniki sugerują, że aktywność a-syntezy cystationinowej w komórkach od pacjentów zawierających zmutowany enzym o umiarkowanie zmniejszonym powinowactwie do 5 -fosforanu pirydoksalu może być zwiększona przez suplementy pirydoksyny in vivo, podczas gdy od pacjentów, których enzym ma bardziej dramatycznie zmniejszone powinowactwo do koenzym nie może być tak zmodulowany z powodu ograniczeń zdolności takich komórek do gromadzenia i zatrzymywania 5-fosforanu pirydoksalu.
[patrz też: czy istnieje magia, bajki terapeutyczne dla dzieci, wkładki ortopedyczne warszawa ]
[więcej w: lakiery do paznokci inglot, bajki terapeutyczne dla dzieci, znieczulenie ogólne powikłania ]