Funkcjonalny stan trombasteniczny w prawidłowych płytkach krwi po podaniu tyklopidyny.

Aby wyjaśnić skłonność do krwawień po podaniu tiklopidyny, zbadaliśmy czas krwawienia skórnego i niektóre funkcje ex vivo płytek krwi otrzymanych od ośmiu zdrowych ochotników przed i tydzień po codziennym podaniu 500 mg tiklopidyny. Stwierdziliśmy, że: tiklopidyna znacząco (P poniżej 0,001) wydłuża czas krwawienia ze skóry i zaburza wiązanie wyznakowanego radioaktywnie fibrynogenu i czynnika von Willebranda, retrakcję skrzepu i agregację płytek krwi w odpowiedzi na ADP, epinefrynę, trombinę, jonofor A23187, kolagen lub kwas arachidonowy. W przeciwieństwie do tego, podawanie tego leku nie wpływało na poziomy płytek wewnątrzpłytkowych cAMP, aglutynację i wiązanie czynnika von Willebranda w odpowiedzi na rystocetynę, zmianę kształtu w odpowiedzi na ADP, kolagen, trombinę lub kwas arachidonowy lub wiązanie prostaglandyny E1 do odpoczynku płytki krwi. Wydzielanie ATP w odpowiedzi na ADP lub epinefrynę zostało całkowicie zahamowane, podczas gdy wydzielanie, jak również synteza tromboksanu w odpowiedzi na wysokie stężenia kolagenu, kwasu arachidonowego, jonoforu wapnia A23187 lub trombiny nie uległy zmianie. Badania z użyciem przeciwciał monoklonalnych wykazały, że kompleks glikoproteiny IIb-IIIa (przypuszczalny receptor dla fibrynogenu i czynnik von Willebranda na powierzchni płytek eksponowanych na naturalnie występujące czynniki agregujące) był ilościowo nieobarczony przez tiklopidynę. Continue reading „Funkcjonalny stan trombasteniczny w prawidłowych płytkach krwi po podaniu tyklopidyny.”

Wywołane płytkami neurogenne skurcze wieńcowe w wyniku nagromadzenia fałszywego neuroprzekaźnika, 5-hydroksytryptaminy.

Celem tego badania było ustalenie, czy 5-hydroksytryptamina uwalniana z agregujących płytek krwi może być akumulowana i uwalniana przez psie mięśnie wieńcowe adrenergiczne, a jeśli fałszywy neuroprzekaźnik spowodował nieprawidłową odpowiedź mięśnia gładkiego na stymulację nerwów. Napięcie izometryczne mierzono w pierścieniach tętnic wieńcowych zawieszonych w komorach narządowych wypełnionych fizjologicznym roztworem soli. Odpowiedź na stymulację elektryczną lub egzogennie dodaną norepinefrynę wywołano po skurczeniu prostaglandyną F2 alfa. Elektryczna stymulacja i egzogenna norepinefryna powodowały relaksację beta-adrenergiczną pierścieni kontrolnych. Jednak po wystawieniu pierścieni na 2 godziny na agregację płytek lub 5-hydroksytryptaminy, stymulacja elektryczna spowodowała skurcze zależne od częstotliwości. Continue reading „Wywołane płytkami neurogenne skurcze wieńcowe w wyniku nagromadzenia fałszywego neuroprzekaźnika, 5-hydroksytryptaminy.”

Rola utraty hemu hemoglobiny w tworzeniu się Heinza: badania z hemoglobiną z częściowym niedoborem hemoglobiny i niestabilnymi genetycznie hemoglobinami

Wiele zmutowanych hemoglobin jest nadmiernie niestabilnych, denaturujących się w krwawiących krwinkach czerwonych do ciał Heinza, co powoduje wrodzoną niedokrwistość hemolityczną Heinza (CHBHA). Podkreśliliśmy, że większość takich hemoglobin obejmuje substytucje aminokwasowe w miejscach sąsiadujących z grupą hemową łańcucha a-polipeptydowego i wykazało, że w ten sposób zmniejsza się wiązanie heminy z globiną. W ten sposób hemesy stopniowo tracono z czterech niestabilnych hemoglobin (Köln, Hammersmith, San Francisco i Zürich), gdy wytrącały się w ciało Heinza w temperaturze 50 ° C. Rola utraty hemu, szczególnie w łańcuchach beta, w powstawaniu ciała Heinza została potwierdzona w badaniach z użyciem hemoglobiny zsyntetyzowanej tak, by zawierała hemocjety tylko w łańcuchach alfa (. 2heme. Continue reading „Rola utraty hemu hemoglobiny w tworzeniu się Heinza: badania z hemoglobiną z częściowym niedoborem hemoglobiny i niestabilnymi genetycznie hemoglobinami”

Zwiększone wydzielanie norepinefryny i prostaglandyny E2 przez nerki podczas wyczerpywania sodu u psa.

Aby ustalić, czy wazoaktywne hormony nerkowe modulują nerkowy przepływ krwi podczas zmian równowagi sodowej, przeprowadzono równoczesne pomiary żylnych i nerkowych stężeń żylnych norepinefryny i prostaglandyny E2 (PGE2) i aktywności reninowej osocza, jak również przepływu krwi przez nerki i ogólnoustrojowej hemodynamiki u 24 pacjentów zubożonych w sód i u 28 psów znieczulonych w stężeniu sodu. Średnie ciśnienie tętnicze psów zubożonych w sód nie różniło się istotnie od tego u zwierząt karmionych normalną dietą sodową, ale pojemność minutowa serca była znacznie niższa (3,07 . 0,18 vs. 3,77 . 0,17 litrów / min, średnia + / – SEM; P <0,01). Continue reading „Zwiększone wydzielanie norepinefryny i prostaglandyny E2 przez nerki podczas wyczerpywania sodu u psa.”

Analiza kinetyczna zaniku insuliny w osoczu u pacjentów z niecukrzycowymi cukrzycami oraz u osób zdrowych: Badanie TRACER z 125I-INSULIN

Dotychczasowe badania dotyczące szybkości metabolizmu insuliny w ludzkiej cukrzycy dały sprzeczne wyniki, prawdopodobnie dlatego, że zostały przeprowadzone na niewielu pacjentach i wykorzystały różnorodne techniki eksperymentalne i terapie danych. Przeanalizowaliśmy kinetykę dystrybucji insuliny i degradacji u 35 zdrowych osób oraz u 42 nieotonizowanych, bezobjawowych, jawnie chorych na cukrzycę, z których 26 miało ponad 40 lat, a 16 miało 40 lat lub mniej w chwili rozpoznania. Projekt badania połączył (a) wykorzystanie znacznika, aby zakłócić minimalnie stan ustalony i uniknąć infuzji glukozy; (b) wytwarzanie oczyszczonej [125I] -monoiodoinsuliny, która ma działanie metaboliczne podobne do działania natywnej insuliny; i (c) nie-kompartmentową analizę krzywych zaniku insuliny 125I-insuliny, które rejestrowano przez 2 godziny po wstrzyknięciu impulsu dożylnym. Stwierdzono, że odsetek klirensu metabolicznego jest podobny u chorych na cukrzycę (404. 18 ml / min. Continue reading „Analiza kinetyczna zaniku insuliny w osoczu u pacjentów z niecukrzycowymi cukrzycami oraz u osób zdrowych: Badanie TRACER z 125I-INSULIN”

Demonstracja braku zmiany poziomu 1 alfa, 25-dihydroksywitaminy D w odpowiedzi na ekstrakt przytarczyc u pacjentów z rzekomopochodną przytarczycą.

Przeprowadzono badania w celu porównania wpływu ekstraktu przytarczyc (PTE) na poziom wapnia w surowicy i moczu (Ca) i fosforu (P), 25-hydroksywitaminy D (25-OHD) w surowicy, 24,25-dihydroksywitaminy D w surowicy (24,25 (OH) 2D), alfa w surowicy, 25-dihydroksywitaminę D (1 alfa, 25 (OH) 2D) i cykliczne AMP w moczu u dwóch zdrowych osób, dwóch pacjentów z niedoczynnością przytarczyc (HP) i sześciu pacjentów z pseudohypopasmopatią (PHP), niektórzy z nich byli na suboptymalnym leczeniu witaminą D. Dwóch pacjentów z PZP badano podczas długotrwałego leczenia alfa, 25- (OH) 2D3. Przed PTE poziom alfa w surowicy, 25 (OH) 2D był u dolnego limitu normalnego u jednego pacjenta i był nienormalnie niski u pozostałych pięciu pacjentów. Żadna z tych osób nie była leczona alfa, 25 (OH) 2D3. Surowica 25-OHD i 24,25 (OH) 2D były albo podwyższone albo w górnej granicy normy u pacjentów otrzymujących witaminę D i były prawidłowe u pozostałych pacjentów. Continue reading „Demonstracja braku zmiany poziomu 1 alfa, 25-dihydroksywitaminy D w odpowiedzi na ekstrakt przytarczyc u pacjentów z rzekomopochodną przytarczycą.”

Wpływ kapsułki Escherichia coli na wiązanie dopełniacza i fagocytozę oraz zabijanie przez ludzkie fagocyty.

Aby zdefiniować mechanizmy, dzięki którym polisacharydowe kapsułki powodują zwiększoną wirulencję na bakteriach Gram-ujemnych, zbadaliśmy wpływ kapsułki Escherichia coli na wiązanie dopełniacza na powierzchnię bakterii i na fagocytozę oraz zabijanie tych bakterii przez mysie makrofagi i ludzkie leukocyty wielojądrzastkowe (PMN) i monocyty. Gdy E. coli były przyłączone do mysich makrofagów konkanawaliną A, makrofagi łatwo fagocytowały niezakapsułkowane, ale nie zakapsułkowane bakterie, nawet w obecności świeżej surowicy mysiej; makrofagi nie zawierały fagocytozy w kapsułkach E. coli, o ile nie dodano przeciwciała przeciwbakteryjnego lub anty-Con A. Podobnie, gdy te bakterie przyłączono do ludzkiego PMN za pomocą Con A, PMN przyjmował nieotoczkowaną, ale nie zamkniętą E. Continue reading „Wpływ kapsułki Escherichia coli na wiązanie dopełniacza i fagocytozę oraz zabijanie przez ludzkie fagocyty.”

Genetyczny niedobór białka przenoszącego estry cholesterylu spowodowany dwoma powszechnie występującymi mutacjami jako główną determinantą podwyższonego poziomu cholesterolu lipoprotein o dużej gęstości.

Genetyczne determinanty poziomu cholesterolu HDL (HDL-C) w ogólnej populacji są słabo poznane. Wcześniej opisywaliśmy niedobór białka przenoszącego ester cholesterolowy w osoczu (CETP) z powodu mutacji intronowej 14 G (+1) -to-A (Int14A) w kilku rodzinach z bardzo wysokimi poziomami HDL-C w Japonii. Osoby badane z HDL-C> lub = 100 mg / dl (n = 130) badano przesiewowo za pomocą konformacyjnej analizy polimorfizmu pojedynczej nici genu CETP. Zidentyfikowano dwie inne mutacje poprzez sekwencjonowanie DNA lub modyfikację map produktów restrykcyjnych za pośrednictwem startera: nowa mutacja miejsca donorowego intronu z 14 splicingami spowodowana insercją T w pozycji +3 z granicy eksonu14 / intron14 (Int14T) i mutacją missense (Asp442 do Gly) w eksonie 15 (D442G). Mutację Int14 T stwierdzono tylko w jednej rodzinie. Continue reading „Genetyczny niedobór białka przenoszącego estry cholesterylu spowodowany dwoma powszechnie występującymi mutacjami jako główną determinantą podwyższonego poziomu cholesterolu lipoprotein o dużej gęstości.”

Modulacja ekspresji genu prokolagenu przez retinoidy. Hamowanie wytwarzania kolagenu przez kwas retinowy, któremu towarzyszy zredukowany poziom kwasów rybonukleinowych informagenu typu I w hodowlach fibroblastów ludzkiej skóry.

Ostatnie obserwacje kliniczne sugerują, że retinoidy, które są często stosowane w dermatologii, mogą wpływać na metabolizm tkanki łącznej w skórze i innych tkankach. W tym badaniu zbadano wpływ kilku retinoidów na metabolizm kolagenu przez fibroblasty ludzkiej skóry w hodowli. Inkubacja hodowanych fibroblastów z kwasem all-trans-retinowym lub kwasem 13-cis-retinowym, w stężeniu 10 (-5) M lub wyższym, znacznie zmniejszyła produkcję prokolagenu, jak zmierzono przez syntezę radioaktywnej hydroksyproliny. Efekt był selektywny w tym niewielkim, jeśli w ogóle, hamowaniu odnotowano w włączaniu [3H] leucyny do białek niekolagenowych, gdy komórki inkubowano z retinoidami w stężeniu 10 (-5) M. Podobne zmniejszenie produkcji prokolagenu odnotowano dla retinolu i retinalu, natomiast aromatyczny analog estru etylowego kwasu retinowego (RO-10-9359) spowodował nieznaczny wzrost produkcji prokolagenu w tych kulturach. Continue reading „Modulacja ekspresji genu prokolagenu przez retinoidy. Hamowanie wytwarzania kolagenu przez kwas retinowy, któremu towarzyszy zredukowany poziom kwasów rybonukleinowych informagenu typu I w hodowlach fibroblastów ludzkiej skóry.”

Wykrywanie immunohistochemiczne i analiza immunochemiczna degradacji kolagenu typu II w chrząstkach stawowych normalnych, reumatoidalnych i chrzęstno-stawowych u ludzi oraz w eksplantatach chrząstki stawowej bydła hodowanych z interleukiną 1.

Zniszczenie chrząstki stawowej i utrata funkcji w chorobach stawów obejmuje degradację proteolityczną macierzy tkanki łącznej. Zbadaliśmy degradację kolagenu chrząstki poprzez opracowanie metod immunochemicznych, które umożliwiają identyfikację i analizę degradacji kolagenu typu II in situ. Wcześniej nie istniała technika specyficznego rozpoznawania degradacji kolagenu typu II in situ w chrząstce stawowej. W metodach tych wykorzystuje się poliklonalną surowicę odpornościową (R181), która specyficznie reaguje z niezwiązanymi łańcuchami alfa i peptydami pochodnymi CNBr, alfa (II) CB11 i alfa (II) CB8 kolagenu ludzkiego i bydlęcego typu II. Podejście eksperymentalne opiera się na fakcie, że gdy fibrylacyjne kolageny są rozszczepiane, spiralna cząsteczka kolagenu rozwija się, odsłaniając ukryte epitopy. Continue reading „Wykrywanie immunohistochemiczne i analiza immunochemiczna degradacji kolagenu typu II w chrząstkach stawowych normalnych, reumatoidalnych i chrzęstno-stawowych u ludzi oraz w eksplantatach chrząstki stawowej bydła hodowanych z interleukiną 1.”