Hamowanie ludzkiej megakariocytopozy in vitro przez czynnik płytkowy 4 (PF4) i syntetyczny peptyd PF4 na COOH.

Podajemy, że wysoce oczyszczony ludzki czynnik płytkowy 4 (PF4) hamuje ludzką megakariocytopoezę in vitro. Przy stężeniu większym lub równym 25 mikrogramów / ml PF4 hamował tworzenie kolonii megakariocytów w około 80% w niestymulowanych hodowlach i około 58% w hodowlach zawierających rekombinowany ludzki czynnik IL3 i czynnik stymulujący kolonie granulocytów i makrofagów. Ponieważ PF4 (25 mikrogramów / ml) nie wpłynęło ani na kolonię mieloidalną, ani na kolonię erytroidalną, sugerowano specyficzność linii tego pochodzenia. Syntetyczny peptyd PF4 na 24 końcu COOH, ale nie 13 reszt, również hamował tworzenie kolonii megakariocytów, podczas gdy syntetyczny 18-pozycyjny beta-tromboglobulina (beta-TG) peptyd i natywna beta-TG nie wykazywały takiego działania podczas testowania w podobnych stężeniach . Badano mechanizm hamowania za pośrednictwem PF4. Najpierw wyliczyliśmy całkowitą liczbę komórek i zbadano dojrzewanie komórek w kontrolnych koloniach (n = 200) i koloniach (n = 100), które powstały w hodowlach zawierających PF4. Całkowita liczba komórek na kolonię nie różniła się drastycznie w obu grupach (odpowiednio: 6,1 +/- 3,0 w porównaniu do 4,2 +/- 1,6), ale liczba dojrzałych dużych komórek na kolonię znacznie spadła w obecności PF4 w porównaniu z grupą kontrolną. (1,6 +/- 1,5 vs. 3,9 +/- 2,3; P mniej niż 0,001). Po drugie, używając linii komórkowej ludzkiej białaczki HEL jako modelu dla prymitywnych komórek megakariocytowych, badaliśmy wpływ PF4 na czas podwojenia komórki, na ekspresję regulowanego wzrostu (H3, p53, c-myc i c-myb ) i nie regulowane wzrostem (beta 2-mikroglobuliny). Przy wysokich stężeniach natywnego PF4 (50 mikrogramów / ml) nie stwierdzono wpływu na czas podwojenia komórki ani na ekspresję H3 lub p53. Natomiast c-myc i c-myb ulegały podwyższeniu. Te wyniki sugerują, że PF4 hamuje tworzenie kolonii przez hamowanie dojrzewania komórek, w przeciwieństwie do proliferacji komórek, być może poprzez indukcję ekspresji c-myc i c-myb. Następnie zbadano zdolność PF4 do hamowania prawidłowej funkcji dojrzewania komórek. Megakariocyty inkubowano w syntetycznych peptydach PF4 lub beta-TG przez 18 godzin, a wpływ na poziomy mRNA dla czynnika V ustalono w 600 pojedynczych komórek metodą hybrydyzacji in situ. Peptyd beta-TG nie miał wpływu na poziomy mRNA FV, podczas gdy spadek ekspresji mRNA czynnika V o około 60% stwierdzono w megakariocytach eksponowanych na peptyd PF4 końcowy wyższy niż lub równy 100 ng / ml syntetycznego COOH na końcu COOH. W związku z tym PF4 moduluje dojrzewanie megakariocytów in vitro i może działać jako negatywny autokrynny regulator ludzkiej megakariocytopozy.
[przypisy: ssanie oleju słonecznikowego, znieczulenie ogólne powikłania, dawca komórek macierzystych ]
[podobne: czy istnieje magia, suszone pomidory przepisy, deca durabolin dawkowanie ]