Biosynteza ludzkiego receptora C3b / C4b podczas różnicowania linii komórkowej HL-60. Identyfikacja i charakterystyka cząsteczki prekursora.

Receptor C3b (C3bR) linii komórkowej ludzkiej białaczki promielocytowej (HL-60) indukowano inkubując te komórki z dimetylosulfotlenkiem (DMSO) lub kwasem retinowym. Większość zróżnicowanych (potraktowanych DMSO lub kwasem retinowym) lecz niezróżnicowanych komórek tworzyło rozety z erytrocytami pokrytymi C3b i były to morfologicznie dojrzałe granulocyty. Komórki HL-60 znakowano powierzchniowo lub biosyntetycznie, a następnie solubilizowano w 1% Nonidet P-40 w obecności wielu inhibitorów proteazy. C3bR wyizolowano przez immunoprecypitację z przeciwciałami anty-C3bR lub przez chromatografię powinowactwa z elementami nieaktywnymi hemolitycznie, w których wewnętrzne wiązanie tioestrowe w łańcuchu alfa zostało rozszczepione (iC3) – lub sefarozy iC4. Autoradiografy żelów NaDodSO4-poliakryloamidu wskazywały, że znakowany powierzchniowo C3bR na zróżnicowanych komórkach miał liczbę 210 000 (nieredukowaną) lub 240 000 (warunki redukujące). Suma (około 85%) wyznakowanego radioaktywnie materiału, który wyizolowano z komórek znakowanych biosyntetycznie, uległa wspólnej migracji z pasmem znakowanym powierzchniowo. Niewielka frakcja (około 15%) materiału wyznakowanego biosyntetycznie, która została wyizolowana za pomocą chromatografii powinowactwa lub immunoprecypitacji, miała wartość 188,000 .M, która nie odpowiadała żadnemu pasmu znakowanemu powierzchniowo. Przypuszczalną cząsteczkę prekursora scharakteryzowano za pomocą eksperymentów z wykorzystaniem impulsów i analizy jego węglowodanów. W badaniach pulsów impulsowych (15-minutowych) zróżnicowanych komórek, wykryto tylko cząsteczkę 188,000-mol wagową po 0 godzinach. Po 2 godzinach, ponad 80% zliczeń przepędziło od 188,000 do 210 000-molowych cząsteczek wagowych. Traktowanie tych dwóch cząsteczek endoglikozydazami wskazało, że 188,000-molowych cząsteczek w teście zawiera oligosacharydy o dużej zawartości mannozy, podczas gdy dojrzałe C3bR mają złożone oligosacharydy. Na podstawie tych danych wyciągamy wniosek, że cząsteczka o masie 188,000 molów jest prekursorem receptora C3b komórek HL-60. Inne eksperymenty wskazywały, że połowa maksymalnego czasu dla nowo syntetyzowanego receptora na osiągnięcie wartości 210 000 pacjentów wynosi 45 minut, a t1 / 2 dla zniknięcia receptora na powierzchni zróżnicowanych komórek HL-60 w hodowli tkankowej wynosi około 10 h. Możliwość obserwowania indukcji receptora C3b jako linii komórkowej HL-60 różni się pouczającym systemem modelowym do badania biosyntezy ludzkiej integralnej receptora glikoproteiny błonowej.
[przypisy: ssanie oleju słonecznikowego, znieczulenie ogólne powikłania, deca durabolin dawkowanie ]
[podobne: trening ogólnorozwojowy na siłowni, pogotowie opiekuńcze lublin, ssanie oleju słonecznikowego ]